- · 他把化学残留挡在餐桌之外[01/11]
- · 中国畜牧兽医学会十四届八次常务理事(扩大)会议在京召开[12/30]
- · 2020羊业发展高级研讨会在天津召开[12/02]
- · 热烈祝贺《畜牧学名词》正式公布并出版发行——畜牧学科基础建设的重大成就[12/02]
- · 中国畜牧兽医学会"科技大讲堂"战疫保供献真知[12/02]
- · 优质肉鸡高质量发展研讨会在宁都顺利召开[11/24]
- · 中国畜牧兽医学会助力第八届象山白鹅节成功举办[11/19]
- · 茵你而来 超你所想 开启独"1"无二免疫新时代——2020经典猪瘟防控与净化高峰论坛在京顺利召开[11/05]
利用同源重组构建BMP6基因真核表达载体及在成纤维细胞中表达量的研究
作者: 张梦瑶 [1] 杨峰 [2] 刘开东 [3] 刘积凤 [1] 柳楠 [1] 贺建宁 [1]
关键词: 同源重组 成纤维细胞 BMP6基因转染 RT-PCR Western Blot
摘要:本研究旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊BMP6基因表达载体及转染成纤维细胞后基因的表达量变化.实验以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊.首先,提取RNA并反转录成cDNA,参照GenBank中BMP6基因序列信息及pcDNA3.1载体序列设计1对含有同源臂的引物,通过PCR扩增获得BMP6基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到pcDNA3.1真核表达载体上.鉴定pcDNA3.1-BMP6表达载体构建成功后,转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3.1-BMP6表达载体转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测BMP6基因在成纤维细胞中表达量的变化.结果表明:经酶切、测序鉴定pcDNA3.1-BMP6表达载体构建成功,并且转染成纤维细胞后BMP6基因的mRNA、蛋白表达量均明显升高,且转染组的表达量极显著高于对照组(P<0.01).在本实验条件下,利用同源重组技术成功构建了敖汉细毛羊BMP6基因表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,为进一步研究其功能奠定基础.
上一篇: 环境温度对黄羽肉鸡后期生产性能、消化功能和热应激相关指标的影响
下一篇: 短乳杆菌及不同品种对全株玉米青贮品质和CNCPS组分的影响