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水牛MYF5基因克隆分析及真核表达载体构建
作者: 张瑞门 [1] 邓彦飞 [1] 奉玲丽 [2] 崔佳瑜 [1] 潘雨 [1] 石德顺 [1] 韦英明 [2] 杨素芳
关键词: 水牛 MYF5基因 克隆 载体构建 骨骼肌发育
摘要:本研究旨在对广西沼泽型水牛MYF5基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体.应用RT-PCR方法从水牛肌肉组织中扩增MYF5基因,测序鉴定后对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,并在细胞水平验证所构建载体的正确性.结果表明:水牛MYF5基因编码区序列长度为768 bp,编码255个氨基酸,其核苷酸序列与牛、山羊、猪、人、猩猩和狼相应序列的相似性分别为99%、98%、94%、91%、90%和89%;水牛MYF5基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性;MYF5蛋白为膜外蛋白,具有MYOD家族标志性MYOD结构域;构建水牛MYF5基因真核表达栽体pMXs-MYF5,转染HEK293T、水牛颗粒细胞后产生绿色荧光信号,表明细胞表达MYF5基因.
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