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猪RUVBL2真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达
作者:徐桢 陈云 卫恒习 李莉 孟立 张守全
关键词: 猪; RUVBL2基因; 真核表达载体; CHO细胞;
摘要：RUVBL2（RuvB-like 2）蛋白是进化上高度保守AAA+（ATPases Associated With Diverse Cellular Activities,AAA）家族成员之一,CHO（Chinese Hamster Ovary）细胞被广泛地用于表达重组DNA蛋白。为探究猪睾丸组织的RUVBL2基因是否能够在CHO细胞中表达,本实验以猪睾丸组织的cDNA为模板,PCR扩增RUVBL2目的基因,并将其克隆至pIRES2-EGFP（Mammalian Expression Vectors pIRES2-EGFP）载体上,进一步转化到DH5α中,再进行PCR、酶切及测序鉴定;将重组质粒转染到CHO细胞中,再进行荧光、RT-PCR、Western blot检测。结果显示:PCR、酶切及测序都证实了RUVBL2基因正确地插入到了载体质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点;荧光、RT-PCR、Western blot也证实了RUVBL2基因在CHO细胞中的成功表达。本实验成功构建了猪的pIRES2-EGFP-RUVBL2真核表达载体,并证实了猪睾丸组织中的RUVBL2基因能够在CHO细胞中表达。